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우리는 꿀벌알프 알이 두 가지 실험을 수행하여 휘발성 항균을 방출하는지 여부를 조사했습니다. 첫 번째 테스트에서는 3개의 꿀벌이 들어 있는 무리 세포(N = 16)를 사용했습니다. 상기와 같이 꿀벌을 모래로 채워진 페트리 접시에 인공 무리 세포로 옮겼다. 계란과 계란없이 꿀벌 중 하나 (실험 꿀벌)와 꿀벌은 물리적 인 접촉없이 동일한 인공 무리 세포에 함께 배치되었다. 계란이없는 다른 꿀벌 (대조군)은 다른 인공 무리 세포 (다른 페트리 접시)에 홀로 보관되었습니다. 우리는 위에서 설명한 대로 곰팡이 감염의 타이밍을 모니터링했습니다. 우리는 전술한 바와 같이 생존 분석을 사용했다. 다시, 유충의 (가능성) 효과를 고려하기 위해, 우리는 또한 유충이 부화 할 때까지 배관에서 기간 동안 분석을 수행 (oviposition 후 3 일). 3일까지 이미 상당한 차이는 계란에서 방출되는 휘발성 물질에 의해서만 발생할 수 있습니다. 마비 된 꿀벌이 항진균 활성을 보이는지 여부를 테스트하기 위해 추가 실험을 수행했습니다. 페트리 접시(N=12)를 무리 세포로부터 분리된 아스퍼질러스 플라부스의 코니디아로 접종하여 메인 텍스트에 기재된 바와 같이 제조하였다. 두 마리의 꿀벌을 가진 무리 세포에서 꿀벌은 별도로 한천에 배치되었다.

꿀벌이 없는 각 꿀벌은 3 ml의 부피(전형적인 무리 세포와 유사)의 캡으로 덮여 있었다. 페트리 접시는 어두운 기후 챔버에서 25°C에서 배양하였다. 각 캡에 의해 커버되는 영역에서 24시간 의 곰팡이 성장 후: 0= 곰팡이 없음, 1 = 아주 작은 곰팡이 (림에서 몇 가지 hyphae), 2 = 작은 곰팡이 (림에서 몇 가지 hyphae), 3 = 강한 곰팡이 (하이픈으로 자란 영역) (부록 1-표 1). 우리는 프리드먼 테스트 (소프트웨어 SPSS 버전 24)를 사용하여 세 가지 치료 그룹 중 곰팡이 성장의 전반적인 차이를 테스트했습니다. 그 후, 쌍으로 비교는 본페로니 보정 Wilcoxon 시험을 사용하여 실시되었다. 위에서 검토 한 결과는 여왕 애벌레에 성인 노동자 꿀벌의 특정 매력을 보여 주지만, 꿀벌은 이러한 인공 조건하에서 여왕을 양육하는 데 효과적입니까? 우리의 연구 결과에 따라, 대답은 `예`입니다. 애벌레가 꿀벌 무리에 의해 사육되었을 때 사육된 성인 여왕의 비율이 성인 꿀벌이 없는 요리에 놓인 애벌레와 비교됩니다. 이것은 성숙한 여왕으로 애벌레의 성공적인 발달을 위한 접시에 무리 배려의 효력을 설명했습니다.

노즈마 감염 실험은 출판된 방법과 유사하다[26]. 우리는 꿀벌 연구소에서 세 가지 건강한 식민지에서 210 개의 질병없는 꿀벌을 얻었습니다. 각 꿀벌은 출현 시 21 그룹 중 하나에 배치되었다, 같은 그룹에 열 꿀벌과 같은 식민지에서 나무 비장 케이지에 함께 보관 (12 × 12 × 12cm). 꿀벌의 각 그룹은 0.5 mL의 시럽 (1 의 수크로오스를 물무게로 1)과 혼합한 꽃가루 1 g을 공급하였고, 2-4 일 동안 완전히 섭취했습니다. 이 꽃가루 케이크는 실험실 케이지와 작은 페트리 접시에 배치되었다. 작물 필드 중 하나 또는 두 개의 제어 다이어트 중 하나에서 꽃가루 사용 되었다. 꽃가루 대조군(„BRL”)은 USDA-ARS 꿀벌 연구소에서 제조한 혼합 꽃가루 식단을 공급하였다. 이 꽃가루는 사막 남서부 (애리조나 꿀벌 제품, 투손, AZ)에서 수집되었으며 사용하기 전에 USDA 농업 마케팅 서비스에서 무농약으로 테스트되었습니다.

단백질 대조군은 인공 꿀벌 꽃가루 대용품인 메가비® 공급되었다. 노즈마 접종은 감염된 콜로니로부터 분리된 노즈마 포자를 50% 자당 용액과 5mL당 2백만 포자의 농도를 얻기 위해 50% 자당 용액과 혼합하여 신선하게 제조하였다. 우리는 성인 생활의 처음 이틀 동안 각 케이지에 노즈마 접종의 5 mL을 공급한 다음 꿀벌에게 50 %(w / v) 자당 용액을 깨끗하게하기 위해 광고 리비텀 액세스를 제공했습니다.